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北京协和发布—新冠核酸检验全过程!

近日,北京协和医院发布了新型冠状病毒核酸检测标准操作流程,供其他符合条件的医疗机构在开展新型冠状病毒核酸检测时参考。而对医护人员最易造成感染的一步就是核酸提取了,下面我们就来介绍下核酸提取时的注意事项及操作步骤。(文末有协和医院发布视频的连接)


核酸提取


注意事项:操作人员在打开试管盖时一定要注意,动作尽量轻柔,防止病毒气溶胶溢出。离心操作时尽量选择支持生物安全的离心机例如白洋医疗器械有限公司生产BY-600A或BY-R20

试剂准备
在AW1中加入无水乙醇130mL,在AW2中加入无水乙醇160mL,计入无水乙醇后及时做好标记,在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE,并颠倒混匀使Carrier RNA充分溶解,就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置,而后通过传递窗传送到样本处理区,或者由专人送到核酸提取实验室中。

样本裂解
用1.5ml的无菌EP管,移液器移取560μl AVL裂解液,加入5.6μl Carrier RNA,加入140μl的已灭活的待提取核酸的待测样本,涡旋振荡15s,室温静止10min。将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物,防止污染。裂解完成后,加入560μl无水乙醇,振荡混匀15s,将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物,防止污染。
向离心柱加入裂解产物630μl,8000转离心1min,若离心机在生物安全柜之外,每次使用都需进行外表面消毒。更换新废液收集管,要从离心机中小心取出离心柱,将上层离心柱转移到新收集管中,继续将剩余裂解产物630μl加入离心柱中,若样本体积大于140μl时需重复此步骤,直到全部裂解产物都过柱离心,8000转离心1min,小心将离心柱转移到新的收集管中。
取500μl AW1加入离心柱中(注意,此处加样操作时务必将移液器吸头接触离心柱内壁缓慢加样),8000转离心1min。小心取出离心柱,更换新的收集管。
取500μl AW2加入离心柱中,14000转离心3min,小心取出离心柱,更换新的离心柱上端收集管,置于离心机中使用最大转速离心1min,以确保将AW2中的残液完全离心干净。
取无菌1.5mlEP管收集核酸,将离心柱上端小心放入1.5mlEP管中,取40-60μl的洗脱液AVE加入到离心柱中(注意:洗脱液应尽量全部覆盖住离心柱膜),用EP管管盖盖住离心柱,使用无菌剪刀剪去原离心柱管盖。
室温静止1min,将其放入离心机中8000转离心1min,回收核酸。丢弃离心柱,EP管中即为获取的提取核酸,做好标记与登记。

用仪器提取核酸
首先按照说明说准备核酸提取试剂,将200μl灭活样本添加到核酸提取试剂中,根据核酸提取仪的设置程序上机提取核酸,等仪器操作结束,提取核酸完成,回收核酸。

协和医院新冠病毒检验视频链接
https://www.pumch.cn/detail/22609.html

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